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差异基因筛选差异基因的方法

发布网友发布时间：2024-10-20 13:55

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热心网友时间：2024-10-31 06:43

在生物研究中，筛选差异基因的方法多种多样，包括DD-PCR、GENE-FISHING、GENE CHIP和高通量测序等。让我们逐一了解一下这些技术的特点。

DDRT-PCR，或称mRNA差异显示聚合酶链式反应技术，结合了PCR和聚丙烯凝胶电泳技术，以及银染或放射性自显影等显色方法。其基本步骤包括：首先从两组平行材料中提取总RNA或mRNA，然后逆转录成cDNA，接着利用随机引物和锚定引物进行PCR扩增，通过电泳分离差异片段，最后通过克隆和测序筛选出差异基因。

GENE-FISHING技术则通过反转录PCR和两步法PCR（GeneFishing PCR）来检测表达差异。它避免了假阳性问题，且无需聚丙烯酰胺凝胶，只需琼脂凝胶即可。该技术的特点包括无假阳性和高特异度，以及成本效益高和重复性好。

基因芯片技术以固相基质上的基因探针检测样品与之的碱基互补，通过计算机分析得出基因表达信息。它包括芯片微列阵制备、样品制备、生物分子反应和信号检测四个阶段，制备方法有表面化学和组合化学。

高通量测序技术，尤其是第二代测序，如de novo sequencing、全基因组重测序、全转录组测序和小分子RNA测序，为基因组和转录组水平的研究提供了强大工具，能发现新的变异和功能信息。

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