CRISPR/Cas9原理及技术优势
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发布时间：2024-09-30 06:16
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时间：2024-10-18 05:22
CRISPR/Cas9技术凭借其独特的原理和应用优势在基因编辑领域崭露头角。这种技术起源于原核生物的防御机制，通过CRISPR RNA（crRNA）和Cas9核酸酶的协作，实现对目标基因的精确剪切。Cas9通过crRNA的引导，识别并切割特定DNA序列，形成DNA双链断裂，进而引发修复过程，实现基因的敲除、突变等改造。
CRISPR/Cas9的成功关键在于sgRNA的设计，合理的设计可以减少非特异性剪切。为提高编辑的准确性，研究人员通过基因工程改良Cas9，使其对DNA的切割更具特异性。CRISPR系统有多种载体形式，如单向载体lentiCas9-Blast和lentiGuide-puro，以及双向载体lentiCRISPRv2，它们分别用于Cas9蛋白和sgRNA的表达。
以GeCKO筛选库为例，这种全基因组范围的筛选技术在癌症研究中发挥了重要作用。通过构建CRISPR-Cas9敲除文库，科研人员能够大规模筛选影响细胞活力或药物反应的基因。相比于siRNA和shRNA库，CRISPR/Cas9库具有更高的敲除效果，成本低、操作简便，成为基因编辑筛选的首选工具。
CRISPR/Cas9技术广泛应用于信号通路研究、药物靶点筛选、药物研发以及基因治疗，其在全基因组水平的筛选方法具有显著优势，使得科学家能够更深入地理解基因功能和疾病机制，为生物医学研究和临床实践带来了*性的改变。
