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pcr引物设计的基本原则有哪些？

发布网友发布时间：2022-04-19 17:42

共1个回答

热心网友时间：2023-07-10 18:55

1、PCR引物设计的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。
2、遵循原则如下：引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整Tm值，引物的长度可以控制在21至28个碱基之间。当扩增≥10kb长片段时，25-35个碱基之间的引物可以提供更好的结果。
3、③引物内部不应出现互补序列。④两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3′端的互补重叠。
4、引物设计有3条基本原则：引物与模板的序列要紧密互补。引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。

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