siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
发布网友
发布时间：2024-06-01 16:54
我来回答
共1个回答
热心网友
时间：2024-06-10 03:24
无痕3个月前觉得RNA干扰（转录后基因沉默）实验难当下研究基因功能的不二之选，相对于knockout还是easy许多。从特异性序列的设计到引物合成到干扰质粒构建抑或是病毒载体介导的siRNA或miRNA的整套技术路线都已经相对比较成熟了，而且有米的话可以直接找公司合成，当然整个过程自己动手的话分子生物学的实验技术学的东西更多。再到后续的转染或感染细胞，体系的建立很关键，若想达到很好的沉默效果，稳定转染是必要条件。总体来说该项技术的出现为功能基因组学的研究发展带来了不可估量的突破和现实意义！
siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
从特异性序列的设计到引物合成到干扰质粒构建抑或是病毒载体介导的siRNA或miRNA的整套技术路线都已经相对比较成熟了，而且有米的话可以直接找公司合成，当然整个过程自己动手的话分子生物学的实验技术学的东西更多。再到后续的转染或感染细胞，体系的建立很关键，若想达到很好的沉默效果，稳定转染是必要条件。总...
ATCC提供的细胞株只能做科研用途吗？
ATCC提供的细胞株不是只能做科研用途，科佰生物科技有限公司是一家专业提供生命科学研究服务外包，生物试剂、耗材销售的综合型公司。公司在多年的发展历程中，逐步建立起分子生物学、蛋白工程、病毒包装、抗体工程、细胞工程、药物研发等一系列...
siRNA转染效率不理想的原因(1)
2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高。由于siRNA沉默时效性的影响，转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测，转染后48-72小时才能进行蛋白检...
siRNA转染后目的基因未被干扰,该怎么办
5、基因问题。有的基因受细胞调控比较严格，mRNA能敲除，但是蛋白水平敲除不下来的，如果这样，建议换一种细胞尝试。6、干扰靶点不合适。需重新设计siRNA。
转染sirna后做q-pcr 做出来结果没区别怎么办
siRNA的沉默效果是有时效性的，在最佳的时间点观察，会得到更加明显的沉默效果，这个时间点的确定不能以同一株细胞转染DNA的经验确定，因为一个是消耗mRNA，一个是产生mRNA。对转染siRNA，在核酸水平，转染后8-48小时，即可观察到mRNA水平的逐步下降，一般来说，转染后48小时进行qRT-PCR检测通常会得到漂亮...
转染进细胞内的目的基因表达的蛋白会不会被降解
能抑制多长时间你需要自己检测。不同细胞、不同siRNA、不同转染试剂都会影响效率。但是假设你转染之后48小时或者72小时之后passage 细胞做MTT或者克隆形成实验，个人觉得是可以的（前提是你有48小时或72小时knockdown证据）。但是如果你knockdown效率不高的话，实验敏感性就大大打折扣（假阴性）。
siRNA转染后什么时候做蛋白检测最好?
siRNA介导的RNAi属于瞬时现象，不能稳定传代，其作用时间不能维持很久，通常建议在转染后3-4 d内完成检测。siRNA转染后最佳检测时间因细胞、目的基因而异，多在转染后24-48 h之间检测。一般建议24-48 h检测mRNA水平，48-72 h检测蛋白水平。
siRNA转染答疑专题总结(下)
Q15: 慢病毒转染多长时间后进行干扰目的基因和蛋白的检测？A15:如果用慢病毒进行瞬时表达，一般至少需要24-48小时，慢病毒基因组是RNA，需要反转录成DNA，再生成siRNA，再干扰，才会发生作用。这个过程和细胞类别、细胞活性、慢病毒具体载体等等有关系。建议取不同时间点检测。另外，慢病毒一般都带筛选基因...
siRNA转染时细胞铺板密度为什么很重要?
siRNA的转染和DNA的转染不一样，DNA的转染是过量表达，死亡一些细胞对过量表达的蛋白本身来说影响不大，但siRNA的转染，死亡的细胞所有的基因表达（包括特定目标基因）都下降，将与siRNA造成的特定目标基因的表达下降现象是一致的，将大大影响实验结果。选用低细胞毒性的转染试剂其实很重要。由于siRNA沉默时效...
求助做SiRNA质粒转染,效率低转染后细胞状态差
做SiRNA质粒转染，效率低转染后细胞状态差 实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒，转染细胞没问题。我觉得只要是注意以下2点就可以了：1，注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌体沉淀时防止菌液散落，经常用75%的乙醇擦拭手套。2，最后洗脱时最好使用无内毒素的水，我们是用注射用水的。无...
siRNA在转染实验过程需要注意哪些事项?
F.通过合适的阳性对照优化转染和检测条件：对大多数细胞，看家基因是较好的阳性对照。将不同浓度的阳性对照的siRNA转入靶细胞（同样适合实验靶siRNA），转染48h后统计对照蛋白或mRNA相对于未转染细胞的降低水平，过多的siRNA将导致细胞毒性以至死亡。G.通过标记siRNA来优化实验：荧光标记的siRNA能用来分析siRNA...
