怎样查看某个引物在某个物种上的非特异性扩增
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发布时间：2024-05-03 12:39
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热心网友
时间：2024-06-30 04:40
在NCBI上做一个primer blast，看看有没有非特异性扩增
怎样查看某个引物在某个物种上的非特异性扩增
在NCBI上做一个primer blast，看看有没有非特异性扩增
什么是PCR技术的非特异性扩增?
就是引物并没有与我们设想的片段结合，最后扩增出非目的条带，一般低退火温度会增加非特异性扩增，高退火温度会减少非特异性扩增。低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
如何使用新版BLAST验证引物特异性
点击BLAST进行搜索。两线段间有连线的代表这些序列与上游引物匹配、并与下游引物互补理论上可以扩增出基因片断。没有连线的，表示单条引物与该基因一致。点击线条直接跳到相应的扩增片段，如果3撇端有5个以上碱基配对，就可能引物非特异性扩增。
请问如何确定LAMP反应发生了非特异性扩增还是产物污染
PCR非特异性扩增指的是你进行PCR所扩增出来的条带不是所要的，引物 与模板在非目的条带处有错配，导致延伸产物不是目的条带。非特异性扩增在 琼脂糖电泳 时可以看到在目的条带外出现了其他条带。引起非特异性扩增的原因有很多，Mg2 +浓度过高、退火温度 太低、引物特异性不好等等原因 ...
2022-03-16引物设计及在线验证
第一步:下拉条目选择物种(HUMAN) 第二步:在输入框中输入刚刚复制来的CDS序列 第三步:单击获取引物(Pick Primers) 第四步:引物序列输出;在最终结果中,有四对引物供选择。 选择合适的引物:怎样算合适? 首先看看引物的就是扩增长度,100~300bp 间比较好扩增; 引物长度在 20~25bp 较好,而且上下游引物间不要相...
请问,能不能根据已知引物查证其对应基因?如果能,请指教,详细些。谢谢...
一个最简单的办法，你可以去NCBI上面的blast下，使用Primer blast，然后输入你自己的引物，在下面Specificity check中把Organism中默认的Homo sapiens点掉，然后输入你用的物种的名称，要不就不填。后面的Database选择Resfeq mRNA，然后点击get premer。接着NCBI就会把你的引物和GenBank中所录入的所有mRNA...
PCR后出现非特异性扩增是什么原因
假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚.⑤模...
我现在有两段引物序列,如何通过BLAST来查到这对引物能扩增出的基因片段...
能查出来 正向引物不变，反向引物找反向互补序列，(就是说AATCGGATCCTCj就要翻成GAGGATCCGATT)把这两个序列用两个空格分开，或者用逗号隔开去blast，为了精确，应该在高级选项限制条件里选择你要的那种生物，你要的那种基因（比如是酶就选择酶那一类）。然后在结果里认真找哈~~...
荧光定量pcr有非特异性扩增怎么解决
从你这个图上看，这是非特异性的扩增。信号非常弱，而且都超过40个循环还没有信号。 之所以前面有下降，其实都是背景噪音信号。你看纵坐标的数值都非常的校所以不是真正的扩增信号，都是背景噪音干扰而已。没有任何扩增产物。实时PCR产物的Tm值大小一般会在80deg;上下，所以溶解曲线不必从40deg;开始，...
关于PCR引物设计的求助
80-200也可以，不要在50bp左右，那样和引物二聚体不易区分，超过200bp可能会影响PCR扩增效率。e 软件给出的引物不能有发卡结构和超过3-4个碱基的匹配，特别是3`端不能有碱基匹配，那样更容易形成二聚体。f 引物设计好以后，在NCBI上做一个primer-blast，检测一下是否有非特异性扩增。
