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特异性鲎试剂及其鉴定?

发布网友发布时间：2022-07-18 03:12

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热心网友时间：2023-10-09 07:18

特异性鲎试剂系我公司国内首创产品（又叫弃G因子鲎试剂或特异性检测内毒素试剂，TAL-ES-Test）。
六十年代美国的Levine和Bang发现革兰氏阴性菌内毒素可以迅速地引起鲎血细胞裂解液形成凝固，从而开发了灵敏度和特异性都非常高的检测内毒素的鲎试验法，此法已广泛被各国所采用，但在使用鲎试剂过程中有时发现假阳性反应（或叫非内毒素引起的凝胶反应），给鲎试验法的应用带来问题。为解决上述假阳性问题，八十年代以后进行了很多研究和改进。1981年Kakinuma发现一种抗癌药（1-3）β-D-glucan（β-葡聚糖）能使鲎试剂凝固，该物质广泛存在于担子菌、真菌、地衣类、酵母和藻类的菌体成分中，在10ng/ml时，就可使鲎试剂凝固。另外，某些人造纤维制造的人工肾透析膜上也含有类似的物质，干扰鲎试验，但它不引起家兔升温。
随后，日本学者陆续发现并纯化凝固酶原、凝固蛋白原、B因子、C因子、G因子、抗脂多糖因子等，详细阐明了鲎试验机理如下：

内毒素 CMPS（β—葡聚糖） -
↓（激活） ↓（激活） │
C因子—→活化C因子 G因子 │
↓（激活） ↓（形成） │旁路
B因子—→活化B因子活化G因子 │
↓（激活） ↓（激活） -
凝固酶原———→凝固酶
↓（激活）
凝固蛋白原 —→凝固蛋白
↓（聚合）
凝胶

为排除（1-3）β-D-glucan激活G因子这一旁路的干扰，使鲎试剂专一对内毒素起反应，日本学者小林于1985年用鲎凝固酶重组法，1990年土谷提出用羧甲基Curdlan封闭法等制造特异性内毒素试剂。
我厂在多年研究的基础上（见1987年第六期《现代应用药学》），1995年春批量生产出新一代特异性鲎试剂投放市场，这种鲎试剂专一对内毒素起反应，不对（1-3）β-D-glucan起反应，在检测药品、生物制品及临床血液样品时，避免假阳性出现，使检测更加准确、可靠。
为方便用户，除原配套内毒素工作品外，还配套（1-3）β-D-glucan供作G因子旁路检测对照。方法如下：

试剂内毒素含量（每管加0.1ml）Eu/ml 空白对照管（加β-glucan0.1ml）
0.5 0.25 0.125 0.06 0.03
鲎试剂（全成份） + + + －－ +
特异性鲎试剂 + + + －－－

注：假定所用的二种鲎试剂灵敏度都系0.125 Eu/ml，先用溶解液溶解，各管分别加0.1ml，再加内毒素0.1ml，空白对照0.1ml（1-3）β-D-glucan，混匀，在37℃水浴放孵1h，取出判断结果，应如上表，即全成份鲎试剂空白管出现阳性，因为它含有G因子，被（1-3）β-D-glucan激活，形成凝胶。特异性鲎试剂则不受（1-3）β-D-glucan激活，不形成凝胶，只专一对内毒素起反应。

特异性鲎试剂的鉴定:
分别取0.1mlβ-葡聚糖加入已经复溶好的0.1ml普通鲎试剂或特异性鲎试剂中（注：普通鲎试剂与特异性鲎试剂灵敏度应相同）混匀，在37±1℃放孵1h，取出判断结果。普通鲎试剂出现阳性，因为它的G因子旁路被β-葡聚糖激活，形成凝胶；特异性鲎试剂不受β-葡聚糖激活，只对内毒素起专一反应，不形成凝胶。